氧化应激诱导神经胶质瘤的研究

　　恶性神经胶质瘤是较常见的原发性脑瘤形式。它们是人类癌症中较致命的，具有高度的侵入性。根据组织的病理特征，神经胶质瘤是从我这里分类的IV，基于他们的恶性程度。手术、放疗和化疗是神经胶质瘤治疗的常见临床情况。虽然取得了很大的进展，但对胶质瘤分子事件的理解仍然很差。

　　PTPN2已被公认为新的癌症靶标。PTPN控制血液系统恶性肿瘤。PTPN减少可能导致CD8+T细胞的活化可以促进自身免疫综合征和体外增加IFN-γ和IL-6的分泌。黑色素瘤和结肠癌，PTPN失敏肿瘤免疫疗法。PTPN2可以通过减少炎性活化和和谐来实现PTPN促进结肠癌增强抗癌免疫疗法。PTPN乳腺癌缺失AKT激活与他莫昔芬的耐药性有关。

　　研究表明，PTPN2增加胶质母细胞瘤，PTPN与胶质瘤的炎症活性密切相关。PTPN胶质瘤大幅增加。与此同时，海外医学网的研究人员发现，PTPN2调节炎症反应和氧化应激。T98G细胞中的PTPN沉默能控制胶质瘤细胞的生长。PTPN炎症反应和氧化应激可能导致胶质瘤的进展。

　　将NHAs，T98G，U87，SW1783和LN229细胞维持在好转中Eagle10%胎牛血清和10%热灭活μg每毫升庆大霉素含有5%CO2的37℃生长在湿润的培养箱中。干扰素-γ肿瘤坏死因子-α购自R＆DSystems。H2O和NAC得自SigmaChemicalCompany。将用PTPN短发夹2序RNA建造的慢病毒质粒将被感染T98G细胞中。慢病毒质粒采用干扰序列作为对照构建。

　　然后包装重组慢病毒感染PTPN2敲低细胞。通过使用G418选择建立适用的稳定转染细胞。转染效率通过定量逆转录聚合酶链反应确认。在六孔培养皿中接种细胞。使用10%甲醛固定菌落2周后10分钟，并使用0分钟.紫染色菌落5%。通过ImageJ测量菌落数，并在光学显微镜下拍摄图像。细胞用FITC-染色膜联蛋白V和碘化丙锭。

　　使用FACSCalibur观察细胞凋亡，并通过Flowjo软件分析。将细胞用抗Ki-67PE在4℃染色30分钟。在细胞内染色之前，对Ki-对67个测量的细胞样进行染色以检测其存活率，并证明存活率大于99%。分析至少50000个细胞。蛋白质在10%十二烷基硫酸钠凝胶电泳中分离，并转移到聚偏二氟乙烯膜上。使用化学发光观察免疫键。

　　患者的神经胶质瘤细胞被注射到单个小鼠的大脑中。人类安乐死在植入后大约2到4周对小鼠进行，并收获它们的大脑。使用的神经胶质瘤细胞来自小鼠大脑中的神经胶质瘤细胞的不同移植物。将埋在石蜡中的肿瘤切片水合，修复暴露在柠檬酸缓冲液中的热诱导抗原，在5%的正常山羊血清中孵化，并在3%的过氧化氢中闭合。

　　用10%正常的山羊血清清洗和切片PTPN一抗孵育EnvisionTMABC免疫检测试剂盒。数据表示为平均值±SD。用于评估组间差异的学生t检验和单因素方差分析。P值小于.05被认为具有统计意义。GraphPadPrism6.进行统计分析。

　　比较来自TCGA健康对照数据集，II级，III级和IV神经胶质瘤患者PTPN2信使RNA水平。PTPN2mRNA高级别胶质瘤患者患者。健康对照组PTPN蛋白质水平也低于胶质瘤患者。在IV在等级胶质瘤中，PTPN2显示较高水平。同时，对不同级别的胶质瘤患者进行健康对照和治疗qRT-PCR分析表明，在高级别胶质瘤组织中PTPN2mRNA表示明显上升。

　　化学染色表明免疫组织，PTPN2.神经胶质瘤患者。PTPN2mRNA水平大T98G，U87，SW1783和LN细胞相比n已。这些表明PTPN2在神经胶质瘤中高度调整。IFN-γ和TNF-α用于激活T98G细胞中的炎症反应。PTPN表达式大大增加了处理IFN-γ和TNF-α在体外的。PTPN2蛋白表达和mRNA分别增加了表达图IFN-γC。PTPN水平明显通过T98G细胞。

　　这些结果表明PTPN2在T98G细胞中被IFN-γ和TNF-α处理上调。存在或不存在5mMNAC在这种情况下，使用或不使用H2O2刺激T98G细胞2小时。PTPN2被H2O氧化，它可以通过T98G细胞中的5mMNAC修饰。当然，一个剂量依赖性，PTPN2用指定剂量h氧化。活性氧可以通过几个信号通路进行调整，包括STAT家族。

　　通过指示的H2O浓度大大刺激p-STAT在T98G细胞中，ROS通过PTPN2失活。集合形成试验显示T98G各种浓度增加了细胞集落形成的能力。另一方面，流式细胞术Ki-67在T98G细胞分析表明，Ki-67剂量依赖性诱导。这些结果表明PTPN2被ROS强氧化和失活。

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