星形胶质细胞和胶质瘤的研究

　　细胞不断分泌不同直径的细胞外囊泡，磷脂和蛋白质进入其环境。一种叫外来体的不同电动汽车，可以作为跟踪宿主细胞或影响靶细胞的生物标记。直径在40-150nm在范围内，多囊泡体与质膜的融合通过细胞释放外泌体。

　　两辆电动汽车和外来体促进相邻或较远社区之间的通信。利用自己独特的外来体交换信息的不同细胞类型。各种生物分子，包括宿主细胞物分子，包括宿主细胞特异性蛋白，mRNA和非编码RNA，为了促进细胞增殖或入侵，正常细胞分泌外泌体以维持其功能。

　　胶质母细胞瘤是一种预后较差的中枢神经系统侵袭性恶性肿瘤，需要预后标记和早期诊断。从胶质瘤患者血浆中提取的外分泌物可作为预后生物标志物。神经胶质瘤外泌体微RNA可以介导免疫控制微环境的形成。

　　假设它来自培养的星形胶质细胞和神经胶质瘤C6细胞的外分泌体根据其细胞来源发挥不同的作用，而来自培养的星形胶质细胞的外分泌体改变了SAM和含SH肿瘤相关基因表达1基因结构域。在C6细胞中。

　　SASH1是SLY在正常脑组织和星形胶质细胞中，支架蛋白家族的成员被广泛表达。C6细胞中SASH1作为肿瘤控制因子的表达，明显低于大鼠星形胶质细胞所涉及的外分泌体的形式和作用。

　　试图确定正常神经胶质细胞和神经胶质瘤细胞产生的外分泌体是否具有不同的蛋白质模式，以调查正常神经胶质细胞外分泌体中的某些因素是否影响神经胶质瘤细胞SASH1经胶质瘤细胞胶质瘤细胞与其微环境的相互作用。。

　　根据机构动物保健和美国国家卫生研究院制定的指南，新生大鼠幼崽和全部动物手术。来自无菌分离P大鼠幼崽的大脑皮质组织，并去除脑膜。

　　解剖组织，消化，然后通过无菌75-μmNitex轻轻滴下滤网。将细胞悬浮液接种到组织培养瓶中。当细胞汇合时，将薄片与150rpm纯化培养物的频率振动16小时。

　　通过GLAST免疫细胞的化学染色证实了继代培养的星形胶质细胞的纯化，当星形胶质细胞培养的时候GLAST表示为95%阳性，认为适合使用。胶质瘤C6细胞补充10%胎牛血清，0.5mM1%青霉素-链霉素的谷氨酰胺和DMEM星形胶质细胞和C6细胞。

　　避免来自FBS外来体的干扰用另一种不含外来体的培养基代替FBS。收集外分泌物并从星形胶质细胞中纯化，并在无外分泌物中FBS培养基培养48小时。

　　使用Ribo外分体试剂分离外分体作为细胞培养基。确定外分体蛋白后，星胶质细胞和大鼠神经胶质瘤应用相同量的星胶质外分体C6细胞。配备蓝色激光和蓝色激光器SCMOS相机的NanosightLM14型，通过NTA分析纯化的外泌体。

　　DPBS用13-14级摄像机记录三个90秒的视频进行中稀释。NTA软件2.3对数据进行分析，优化每个样品的检测阈值，屏幕增益为10，以便在较小背景下尽可能多地跟踪颗粒。

　　将分离出来的外体干燥到300目碳涂层透射电子显微镜网格上进行辉光放电处理，并使用HITACHI透射电子显微镜观察。电子显微镜图像子显微镜部门分析外泌体样品。

　　用TRIzol从细胞中提取总体RNA。用于检测SASH1、高迁移率的家庭框架1蛋白和内部控制基因甘油醛3-磷酸脱氢酶引物。免疫印迹采用奥德赛光密度计程序进行分析。

　　为了进行免疫染色，在实验前一天，培养的星形胶质细胞以3种形成×10初始密度接种至24孔板中设置的初始密度接种Poly-L-Lysine玻片上的包被。通过将100ng/mLHMGB1重组蛋白用于星形胶质细胞培养60h，随后通过qRT-PCR和PCR检测SASH研究细胞外表达HMGB1对SASH1基因表达的影响。通用对照siRNA和基因特异性HMGB1siRNA的序列。

　　根据制造商的描述，培养的细胞将在275V电穿孔2.5ms。由于细胞中HMGB1.高蛋白水平，所以设计了三种HMGB1siRNA。混合的HMGB1siRNA的终浓度为240nM。

　　实验至少进行了三次重复。使用GraphPadPrism5.0软件分析测量数据并表示平均值±SE。统计是通过单向方差分析来评价的，统计是的，并通过Studentt检查确定组间差异的性。P?<0.05的结果被认为具有统计意义。

　　神经系统疾病包括帕金森病、阿尔茨海默病和神经胶质瘤[其独特的信息。在细胞信号转导和细胞行为中，作为细胞外囊泡的外体可以起到作用，作为细胞间通信的介质。培养的星形胶质细胞和神经胶质瘤C不同蛋白质模式的6细胞外泌体。

　　通过粒度分布分析度分布分析鉴定后进行TEM图像分析，并使用外泌物标记蛋白质CD63和TSG101进行WB收集这些蛋白质进行分析和分析MS分析。总共有668种外分泌体蛋白和397种独特的外分泌体蛋白来自星形胶质细胞衍生的外分泌体，以及胶质瘤C总共发现了443种蛋白质和172种独特蛋白质。原始数据可以在名“MS结果和AS和C分析外泌体蛋白”获取补充文件。KEGG和GO分析结果表明，的星形胶质细胞和神经胶质瘤C细胞获得的总外泌体蛋白中的模式相似。

　　研究表明，正常的神经胶质细胞和神经胶质瘤细胞来自相同的来源，即神经胶质细胞，它们具有相似的来源GO具有类似基因和基因产物属性的信息。只有独特的外泌蛋白表现出不同的代谢途径。神经胶质瘤被发现C6.细胞独特外泌体蛋白的较高代谢途径包括磷脂酰肌醇-3-激酶信号传导和肌动蛋白细胞骨架的调节。前者涉及细胞存活、增殖和粘附，后者涉及细胞迁移和癌症。溶酶体中聚集了星形胶质细胞的代谢途径，RNA转录本，蛋白酶体和吞噬体。

　　来自正常神经胶质细胞和神经胶质瘤细胞的外分泌体蛋白有不同的代谢途径，尽管它们在这里GO中有类似的信息簇。

　　正常或多余的细胞可以释放到培养基中。考虑到正常神经胶质细胞的外促进细胞增殖，测试正常神经胶质细胞的外分泌物能否改变C抑癌基因6SASH1的表达。qRT-PCR结果表明，处理时间为60小时，并添加到培养基中AS-EXO之后，神经胶质瘤C6细胞中SASH1mRNA水平提高了54.8％，表明AS-EXO可能包括原因SASH神经胶质瘤细胞中提高因素的表达。

　　在这一结果的指导下，研究人员进一步研究了哪些蛋白质EXO对SASH这种功能背后的表达。研究人员考虑HMGB1、它是一种多功能促炎因子和高度保守的非组蛋白。

　　大量研究表明，HMGB在炎症、细胞分化和肿瘤细胞迁移等多种细胞过程中起着重要作用，它们是非经典的细胞因子。神经胶质细胞HMGB过度表达可能会减少SASH1的表达，而HMGB1有助于SASH甲基化导致神经胶质瘤C6细胞中HMGB1增加表达。将重组HMGB含有神经胶质细胞的培养基应使用蛋白质，SASH1的mRNA表达下降了35.其蛋白质水平下降52%.2%的研究人员支持以前的研究成果，包括HMGB1表达导致星形胶质细胞SASH降低蛋白质水平。

　　研究人员考虑AS-EXO和C6-EXO中HMGB蛋白质水平是否会有所不同。HMGB显示蛋白水平AS-EXOS比在C6-EXOS。

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