抑制神经胶质瘤细胞侵袭——七氟醚

　　胶质瘤是一种预后较差的原发性脑肿瘤，有许多治疗胶质瘤的策略。切除术是原发性和晚期胶质瘤患者的主要治疗方法。胶质瘤外科肿瘤学：较先进的技术。虽然新的手术技术取得了很大的发展，但癌症的传播和转移也增加了，因为癌细胞在手术过程中释放到循环中。

　　因此，迫切需要探索预防癌细胞扩散和转移的新策略，以改善切除术后的癌症预后。迁移和入侵有助于患者在胶质瘤中死亡，阻断癌细胞转移已被证明是一种有前途的治疗方法。恶性胶质瘤的侵袭及其对治疗的影响。麻醉技术和麻醉剂对癌症的迁移和侵袭有重要影响，影响手术治疗患者的预后。麻醉技术等围手术因素对癌症复发的影响。

　　异氟醚、安氟醚、七氟醚等挥发性麻醉剂已被认为能在人类癌细胞中发挥抗增殖作用。与丙戊酸酯致畸剂相比，吸入麻醉剂的抗增殖作用。Sev它是一种挥发性麻醉剂，广泛应用于癌症麻醉，包括神经手术。例如，挥发性麻醉剂Sev或地氟醚通过降低结肠直肠癌中基质金属肽酶9来抑制细胞入侵。挥发性麻醉剂通过降低基质金属蛋白酶-9来减少结肠直肠癌细胞的侵袭。

　　Sev抑制迁移和入侵，但通过改变方式促进肺癌细胞凋亡。挥发性麻醉剂七氟醚抑制肺癌细胞miRNA干扰肺癌细胞。七氟醚灭活p38MAPK抑制肺癌细胞侵袭和迁移的信号传导途径。Sev暴露会降低U87-MG胶质瘤细胞的迁移和七氟醚和硫喷妥钠的预处理会减弱U87MG胶质瘤细胞MMP-迁移及活动。Sev神经胶质瘤细胞迁移和侵袭的调节机制尚不清楚。

　　microRNAs是一种小型非编码RNA，在胶质瘤的发生和发展中起着关键作用。miR-146b-5p它们在癌症转移和发展中发挥着重要作用，在不同的人类癌症中，如甲状腺癌和非小细胞肺癌，作为致癌基因或肿瘤抑制因子，增加了不同甲状腺乳头状癌细胞的迁移和入侵。通过靶向ZNRF3.促进甲状腺癌上皮间质转化，诱导甲状腺癌。抑制非小细胞肺癌miRNA以及预后预测的作用。

　　miR-146b-5p它被认为可以抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，并可以作为胶质瘤中的肿瘤抑制因子和新的预后生物标志物TRAF预防肿瘤抑制和预测人脑胶质瘤的预后。关于Sev是否在神经胶质瘤的进展中进行调节miR-146b-5p知之甚少。研究人员测量Sev探讨了胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响miR-146b-5p是否参与Sev调整效果。

　　人神经胶质瘤细胞系U87-MG和U251含有10%胎牛血清Dulbecco改良Eagle生长在培养基中。1%青霉素含有5%CO培养箱37°C。对于Sev暴露，对数期U87-MG和U251细胞在平板电脑上接种并培养过夜。然后将细胞板放置在与麻醉机相连的气密玻璃室中。使用麻醉蒸发器Sev供应到房间，并通过气体监测器连续监测Sev浓度。将细胞暴露在不同浓度下Sev在正常情况下培养6小时，然后进一步分析。

　　细胞迁移和入侵是通过使用来测量的。对于细胞迁移，100ul不含血清的DMEM培养基中的U87-MG和U251细胞在上室接种，含有10%FBS的500ul培养基于下室。孵化8小时后，下表面的细胞为0.1%结晶紫色染色，然后在显微镜下观察，有五个随机区域。跨孔室预涂侵袭测定Matrigel，并以同样的方式进行实验。测量重复三次。

　　转染或处理Sev后，收集U87-MG和U251细胞，洗涤，然后在RIPA裂解缓冲液中裂解。各组的上清液在12000经由离心收集克保持10分钟，并根据制造商的说明书使用BCA蛋白质测定试剂盒进行定量。将等量的蛋白质在100℃变性5分钟，通过SDS-PAGE凝胶电泳分离，然后转移到聚偏二氟乙烯膜。在室温下用5％脱脂乳封闭膜1小时，在4℃下与一抗相互作用过夜，然后在室温下与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育2小时。针对MMP16，GAPDH和二抗的抗体购自Abcam。

　　研究Sev对神经胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响，用不同浓度的Sev处理U87-MG和U251细胞6小时，然后培养24小时，放入跨孔室中。孵育8小时后，计数迁移或侵袭细胞的数量。与对照组相比，以浓度依赖性方式处理Sev后，U87-MG和U251细胞的细胞迁移明显受到抑制。Sev的暴露也导致U87-MG和U251细胞的侵袭能力以浓度依赖性方式逐渐丧失。为了探索潜在的机制，在处理不同浓度的Sev后，在胶质瘤细胞中测量miR-146b-5p的表达。

　　在以剂量依赖性方式处理Sev后，在U87-MG细胞中miR-146b-5p的表达显着升高。与对照组相比，用Sev处理的U251细胞也显示出miR-146b-5p水平的明显增加。用5.1％Sev处理的细胞用于随后的实验，因为该组中较显着的改变。研究人员选择5种miRNAs在胶质瘤中下调并检测U251中的表达水平。用qRT-PCR处理5.1％sevoflurance后的细胞。结果显示miR-146b-5p在五种差异表达的miRNA中显着改变，因此选择miR-146b-5p用于进一步研究。

　　鉴于MMP16是癌症中细胞转移的关键因素，接下来在处理不同浓度的Sev后在U87-MG和U251细胞中测量MMP16的丰度。与对照组相比，Sev的处理导致U87-MG和U251细胞中MMP16蛋白水平以浓度依赖性方式逐渐降低。证实MMP16在神经胶质瘤进展中的作用，在暴露于5.1％Sev之前，用MMP16过表达载体或载体转染细胞。转染后，转染MMP16的U87-MG和U251细胞中MMP16蛋白的丰度明显高于空载体组。

在Sev处理的神经胶质瘤细胞中研究了MMP16对细胞迁移和侵袭的影响。跨孔分析显示MMP16的过表达显着减轻了Sev介导的对U87-MG和U251细胞中迁移和侵袭的抑制。

　　为了探索miR-146b-5p和MMP16的潜在关联，通过TargetScan在线预测它们的推定结合位点。构建了wt或mut荧光素酶报告载体并分析了转染后的荧光素酶活性。结果显示转染MMP16-wt和miR-146b-5p的U87-MG和U251细胞的荧光素酶活性显着低于NC组，而MMP16-mut组几乎没有变化。还进行了RIP检测以确定这种相互作用，与NC组相比，转染miR-146b-5p的U87-MG和U251细胞中MMP16的富集明显增强。

在胶质瘤细胞中研究了miR-146b-5p对MMP16蛋白表达的影响。蛋白质印迹分析显示，在U87-MG和U251细胞中miR-146b-5p的过表达显着降低了MMP16蛋白的丰度，而miR-146b-5p的敲低则显着增加了MMP16蛋白的丰度。

　　为探讨miR-146b-5p介导的迁移和侵袭是否受MMP16调控，用抗NC，抗miR-146b-5p，抗miR-146b-5p和scramble或siMMP16转染胶质瘤细胞，然后用5.1％Sev。蛋白质印迹分析数据显示，miR-146b-5p的下调导致Sev处理后U87-MG和U251细胞中MMP16蛋白水平强烈增加，其受到MM16干扰的削弱。跨孔试验显示MMP16的沉默减弱了miR-146b-5p介导的Sev处理的U87-MG和U251细胞中迁移能力增加的消耗。在治疗Sev后，MMP16干扰还减轻了miR-146b-5p诱导的U87-MG和U251细胞中侵袭细胞数量的减少。

　　现有证据表明肿瘤细胞迁移和侵袭有助于癌症传播和恶性肿瘤。肿瘤细胞的侵袭和迁移：多样性和逃避机制。吸入麻醉剂氟烷，Sev和异氟醚的应用在人类癌细胞系中起着抗癌作用。吸入麻醉剂氟烷，七氟醚和异氟醚对人体细胞系的影响。Sev暴露抑制了结直肠癌和肺癌的迁移和侵袭。挥发性麻醉剂通过下调基质金属蛋白酶-9来减少结肠直肠癌细胞的侵袭。

　　七氟醚通过灭活p38MAPK信号传导途径抑制肺癌细胞的侵袭和迁移。Sev对胶质瘤细胞迁移和侵袭的抑制作用，并首次提供了Sev在胶质瘤中的调节网络。

　　前一发现显示Sev或硫喷妥钠降低胶质瘤细胞的迁移和MMP2活性七氟醚和硫喷妥钠预处理可减弱U87MG胶质瘤细胞中MMP-2的迁移和活性。Sev处理抑制U251胶质瘤细胞的细胞迁移和侵袭七氟醚通过上调microRNA-637抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。Sev治疗导致抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。允许Sev调节神经胶质瘤转移的潜在机制仍然很不清楚。Sev暴露可能导致miRNA失调。

　　例如，Sev通过调节miR-203抑制乳腺癌细胞的增殖。七氟醚通过上调乳腺癌细胞中的microRNA-203来抑制增殖。为了确定Sev诱导的迁移和侵袭的丧失是否受miRNA调节，研究人员测量了Sev处理后神经胶质瘤细胞中的miRNA水平。Sev处理的U87-MG和U251细胞中miR-146b-5p高表达，发现miR-146b-5p可能在Sev介导的胶质瘤转移中起重要作用。

　　miR-146b-5p已被证明是许多类型癌症的肿瘤抑制因子，包括非小细胞肺癌和胆囊癌在非小细胞肺癌中起抑制miRNA和预后预测的作用。鉴定miR-146b-5p在组织中作为胆囊癌预后的新型生物标志物。MicroRNA-146b-5p通过靶向表皮生长因子受体抑制胆囊癌的生长。研究人员假设miR-146b-5p也可能作为胶质瘤的肿瘤抑制因子。

　　miR-146b-5p的敲低逆转了Sev诱导的神经胶质瘤细胞中迁移和侵袭的减少，表明Sev通过调节miR-146b-5p在神经胶质瘤中起抗转移作用。miR-146b-5p的消除有助于胶质瘤细胞的迁移和侵袭，这也与之前的努力一致表达并减少胶质瘤的体外迁移和侵袭。癌症投资。已知功能性miRNA通过结合它们的3'UTR来调节靶表达。miR-146b-5p可通过调节MMP16在肾癌和胰腺癌的迁移和侵袭中发挥抑制作用通过海绵状miR-146b-5p上调MMP16表达来促进肾癌的生长和侵袭。

　　miR-146b-5p靶向MMP16对细胞迁移和胰腺癌侵袭的抑制作用。胶质瘤细胞中也报道了miR-146b-5p和MMP16之间的相互作用通过靶向MMP来抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭。miR-146b-5p通过靶向MMP16抑制胶质瘤的迁移和侵袭。假设MMP16与胶质瘤进展中的miR-146b-5p相关。荧光素酶活性和RIP分析。

　　miR-146b-5p和MMP16之间的相互作用通过MMP16-wt和miR-146b-5p组中荧光素酶活性的丧失以及miR-146b-5p和Ago2RIP组中MMP16富集的增强来验证。

　　基质金属蛋白酶：一种具有挑战性的癌症治疗范例。Sev可以降低MMPs的表达，如MMP2和MMP9。七氟醚和硫喷妥钠预处理可减弱U87MG胶质瘤细胞中MMP-2的迁移和活性。

　　七氟醚预处理通过抑制大鼠脊髓缺血后小胶质细胞MMP-9的表达来改善神经元缺陷。通过作为miRNA的功能靶标促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭miR-146b-5p通过靶向MMP16抑制胶质瘤的迁移和侵袭。miR-132可通过体外靶向MMP16抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移。在Sev处理后MMP16蛋白表达在神经胶质瘤细胞中减少，并且其过表达减轻了Sev诱导的对神经胶质瘤细胞迁移和侵袭的抑制。

　　这也揭示了MMP16的转移前作用，跨孔分析显示，MMP16的干扰减弱了miR-146b-5p下调对Sev介导的胶质瘤细胞迁移和侵袭的调节作用。这些结果反映了Sev通过调节miR-146b-5p和MMP16表达来调节神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭。体内实验有助于更好地了解胶质瘤生物学及相关机制。胶质瘤：实验模型和现实。应建立动物模型，探讨Sev在胶质瘤中的作用和机制。

　　总之，可吸入麻醉剂Sev阻断了胶质瘤细胞的迁移和侵袭，这种作用是由miR-146a-5p和MMP16介导的。Sev在胶质瘤中具有新的理论基础，并且可能对手术切除期间挥发性麻醉剂在神经胶质瘤中的应用产生重大的临床意义。

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