CSPG4在胶质瘤免疫控制治疗中的研究进展

　　1.淋巴细胞介导免疫控制。

　　NK细胞是细胞毒性淋巴细胞中较合适的抗肿瘤细胞，可以在没有抗体依赖的情况下直接杀死肿瘤细胞。现有研究表明，NK细胞可以调节肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的表达，诱导肿瘤中辅助T淋巴细胞(TH1)因子的表达。通过细胞因子分泌，NK细胞的免疫调节能力可以使肿瘤相关巨噬细胞从抗炎向促炎倾斜，提高肿瘤的免疫编辑能力。超过70%的胶质瘤相关细胞倾向于促进M2表型的肿瘤细胞增殖，NK细胞的这些特性对胶质瘤免疫治疗的成功至关重要。利用NK细胞释放的细胞因子将免疫组织从抗炎转变为促炎，结合NK细胞和硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2的单克隆抗体mAb9.2.27诱导抗体依赖的细胞毒性效应，进一步探索NK细胞的治疗潜力。

　　活化的NK细胞能分泌与胶质瘤有关的干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)。而且IFN-γ可以激活神经系统小胶质细胞。小胶质细胞在神经系统中相当于巨噬细胞，可以杀死胶质瘤细胞，控制肿瘤生长。在这个过程中，mAb9.2.27对肿瘤杀伤效果没有影响。但是TNF-α对胶质瘤的杀伤作用并不明确，因为胶质瘤可以通过增强PI3K/AKT和NFHB信号传导来抵抗TNF-α对肿瘤细胞的杀伤。硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2可作为肿瘤细胞相关抗原(tumor-associatedantigens、TAA)，特异性识别TAA的T细胞作为肿瘤靶点受到较大关注。随着单克隆抗体技术的发展，T细胞介导淋巴系统产生特异性识别CD19的抗原受体嵌合体(chimericantigenreceptor、CAR)，对恶性肿瘤的治疗产生影响，证明该疗法在黑色素瘤治疗中的作用。由于硫酸软骨素蛋白聚糖4在胶质瘤中的广泛表现，未来也可以作为嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(CART)的

　　带有硫酸软骨素蛋白聚糖4基因的嵌合抗原受体转导的T细胞可以产生多种细胞因子，如TP41.2转导的T细胞和LN43系恶性胶质细胞共同培养，可以产生三种细胞因子:IFN-γ.TNF-α和粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

　　2.免疫治疗2硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2抗体介导。

　　单克隆抗体Mab是由专用抗原决定簇产生的抗体。与常规抗体相比，它具有特异性强、灵敏度高、副作用小的优点。以硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2为高表达硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2的肿瘤细胞，目标是硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2。新血管的形成是恶性肿瘤的主要特征，也是促进肿瘤生长和扩散的主要因素。周细胞是活跃在肿瘤微环境中的细胞。在胶质瘤新生血管中，硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2的单克隆抗体mAb2164H5和四型胶原蛋白可以并列嵌入血管周围基底膜的周细胞，而mAb2161F9是针对肿瘤血管内壁周细胞的单克隆抗体。通过抗原抗体结合控制周细胞活性，可以合适控制肿瘤血管的形成、肿瘤的生长和转移。还有多种功能相似的单克隆抗体，如mab2161D7.mab216G4，而2161D7/Glut-1.2166G4/Glut-1主要针对分散在肿瘤组织中的肿瘤细胞。硫酸软骨素蛋白聚糖4在细胞内的信号传递中起着重要作用，可以激活ERK、FAK等细胞内的信号传递，这些信号传递与肿瘤的生长和转移密切相关。

　　scFv-FcC21是一种特异性识别人类硫酸软骨素蛋白聚糖4的单链抗体，对胶质瘤、黑色素瘤、骨肉瘤、白血病等恶性肿瘤有特异性控制作用。它对胶质瘤的控制可能是通过干扰硫酸软骨素蛋白聚糖4在肿瘤信号传导中的作用来控制肿瘤在体内外的增殖和转移。发现ScFv-FcC21与硫酸软骨素蛋白聚糖4基因敲除的肿瘤细胞无明显反应，与硫酸软骨素蛋白聚糖4阳性表达的细胞可形成免疫沉淀，表明ScFv-FcC21对硫酸软骨素蛋白聚糖4阳性细胞有特异性控制作用。

　　3.基因治疗

　　基因治疗是指将外源正常基因引入靶细胞，以纠正基因缺陷或异常引起的疾病，而胶质瘤是由硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2基因表达异常引起的。表达硫酸软骨素蛋白聚糖4的胶质瘤对放疗有更强的抵抗力，能激活细胞有丝分裂的G1.G2位点，应对DNA损伤。在胶质瘤细胞中，重组人过氧化物还原酶(PRDX-1)和硫酸软骨素蛋白聚糖4基因的表达都提高了，用shRNA敲除U251中的PRDX-1，NG2的表达会受到明显的影响，表达硫酸软骨素蛋白聚糖4的胶质瘤细胞有丝分裂的G2期会因PRDX-1的敲除而停止，U251的抗放疗能力会明显下降。

　　硫酸软骨素蛋白聚糖4基因敲除的肿瘤细胞可以削弱β-1整合素的信号传递功能，增加肿瘤细胞对细胞毒性药物治疗的反应，从而增强化疗效果。siRNA敲除硫酸软骨素蛋白聚糖4/NG2后，可以减缓肿瘤的生长速度，控制肿瘤对周围组织的侵袭。β-1整合素的信号传递和后续FAK磷酸化是促进肿瘤细胞增殖和迁移的关键机制。siRNA可以通过敲除周细胞的NG2基因来降低β-1整合素60%的活性，FAK磷酸化在NG2缺失的外周细胞中比对照组细胞减少40%。

　　通过暂时阻断NG2在胶质瘤中的表，siRNA可以提高胶质瘤细胞对TNF-α等凋亡因子的敏感性，持续控制活体恶性胶质瘤细胞中NG2基因的表达，从而降低其生长速度和体积。SiRNA对NG2的基因沉默可以增加肿瘤细胞对TNF-α的敏感性，从而控制肿瘤的生长。