胶质瘤干细胞免疫治疗：针对胶质瘤干细胞的肿瘤疫苗

　　胶质瘤干细胞免疫治疗：针对胶质瘤干细胞的肿瘤疫苗。肿瘤疫苗可以激活宿主免疫系统，识别和杀死肿瘤细胞，这是一种主动免疫治疗。激活免疫系统的最佳方法是刺激多功能抗原呈递细胞(APC)，如树突状细胞(DC)、巨噬细胞、B淋巴细胞(以下简称B细胞)，其中树突状细胞是最佳选择。树突状细胞从外周血单个核细胞(PBMC)中分离纯化。首先，IL-4和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激生成不成熟的树突状细胞，然后通过IL-1b.IL-6.前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的混合物刺激获得成熟的树突状细胞。

胶质瘤干细胞免疫治疗

　　树突状细胞疫苗治疗肿瘤的主要目的是产生特异性辅助T细胞(Th)，从而激活细胞毒性T细胞的抗肿瘤作用。树突状细胞在肿瘤细胞中识别的各种成分称为肿瘤相关抗原。激活的树突状细胞返回患者体内后，通过向肿瘤特异性T细胞提取肿瘤相关抗原，增强抗肿瘤免疫反应。

　　恶性实体肿瘤动物模型的观察结果表明，靶向肿瘤干细胞相关抗原的树突状细胞疫苗疗效明显:在恶性黑色素瘤模型中，由肿瘤干细胞裂解物引起的树突状细胞可以使荷瘤小鼠分泌更多的INF-γ和IL-4，抑制肿瘤生长，延长小鼠存活期；在卵巢癌模型中，含有NANOG肽的树突状细胞可以识别肿瘤干细胞，诱导高度特异性抗肿瘤T细胞的免疫反应；研究表明，树突状细胞可以通过提供肿瘤特异性抗原和Toll样受体(TLR)来激活宿主对黑色素瘤的免疫反应，肿瘤细胞崩解后的一些成分可以增强树突状细胞对主动免疫的刺激；临床研究表明，胶质瘤患者术后接种树突状细胞疫苗是安全有效的。

　　胶质瘤干细胞免疫治疗，由此可见，肿瘤疫苗通过向免疫细胞暴露肿瘤相关抗原，激活免疫系统，产生抗肿瘤作用。因此，能否制备出能否有效识别肿瘤干细胞并激活免疫反应的树突状细胞疫苗，是提高免疫治疗效果的关键。Jachetti等研究表明，与经分化肿瘤细胞过敏的树突状细胞相比，耐放射治疗的肿瘤干细胞过敏的树突状细胞可以促进强，分泌更多的IFN-γ。

　　Dashti等。通过小鼠黑素瘤细胞B16F10和肿瘤干细胞裂解物引起的树突状细胞，发现后者引起的树突状细胞可以明显延长荷瘤小鼠的存活期。Ning等发现，对肿瘤干细胞裂解物引起的树突状细胞可以使免疫治疗的荷瘤小鼠产生更高水平的IgG，从而在补体存在的情况下增强其细胞毒性；此外，在黑素瘤和鳞状细胞癌模型中，对肿瘤干细胞引起的树突状细胞可以使荷瘤小鼠产生更强的细胞毒性。

　　胶质瘤干细胞具有相同的树突状细胞致敏能力，因此直接针对肿瘤细胞亚群，建立胶质瘤肿瘤疫苗有望成为有效的治疗方案。临床试验表明，胶质母细胞瘤患者通过移植转染自体胶质瘤干细胞mRNA的树突状细胞，刺激适应性免疫反应，使肿瘤消退，延长总生存期(OS)。Finocchiaro和Pellegata总结了一系列临床前研究结果，得出结论，富含胶质瘤干细胞的细胞群致敏树突状细胞可以增强胶质瘤的免疫治疗效果，进而提出FABP7.GLAST.CD133.SOX2等。胶质瘤干细胞表现力高，是肿瘤疫苗免疫治疗的良好靶点，有利于提高胶质瘤患者的整体生存率。

　　为了制备胶质瘤干细胞肿瘤疫苗，需要将手术切除的肿瘤标本制备成单细胞悬液，然后在干细胞培养条件下分离单个胶质瘤干细胞，增殖成干细胞球，然后提取胶质瘤干细胞mRNA，转染成单个核细胞来源的树突状细胞。ICT-107疫苗是一种树突状细胞，由6种合成多肽对自体外周血单个核细胞分化过敏，可靶向胶质瘤干细胞相关抗原，如HER2、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)、gp100.IL-13Rα2、酪氨酸相关蛋白质-2(TRP-2)、黑色素瘤抗原基因-1(MAGE1)等。

　　Phuphanich等。在新发胶质母细胞瘤的标准治疗方案中增加了ICT-107疫苗治疗。结果表明，患者中位无进展生存期(PFS)为16.9个月，中位总生存期为38.4个月。部分患者接种疫苗后再次手术切除，切除标本中胶质瘤干细胞数量明显减少，表明疫苗可诱导机体抗肿瘤免疫靶向杀伤胶质瘤干细胞。

　　Wen等二期临床试验是胶质瘤干细胞免疫治疗的第一次随机对照试验。观察新胶质母细胞瘤患者手术和放化疗后树突状细胞疫苗对患者无进展生存期或总生存期的影响。结果表明，ICT-107组患者中位无进展生存期延长2个月，差异具有统计意义，总生存期延长但未达到统计意义。

　　胶质瘤干细胞免疫治疗，VikMo等研究发现，胶质瘤患者在接受标准化综合治疗后，在皮下注射胶质瘤干细胞疫苗，可成功诱发增强的抗肿瘤免疫反应(7/10例)；接种疫苗的患者生存期比对照者长2.9倍，无严重不良反应。在生理状态下，中枢神经系统在主动免疫治疗过程中激活的树突状细胞较少，需要补充造血干/祖细胞，提供树突状细胞，持续诱导有效的T细胞反应。造血干/祖细胞进入中枢神经系统后枢神经系统后分化为CD86+CD11c+MHCⅱ+细胞，表现出激活树突状细胞的形状和功能，从而刺激细胞的毒性免疫反应。造血干/祖细胞来源的细胞表现出很强的抗肿瘤免疫作用，如CD86。

　　近年来，SOX2作为维持胶质瘤干细胞的重要转录因子，被认为是主动免疫治疗的新靶点。SOX2肽疫苗能显著增强全身和局部免疫反应，延长肿瘤模型中荷瘤动物的存活期。无论联合化疗与否，都能观察到确切的疗效。因此，针对SOX2等胶质瘤干细胞相关基因的疫苗可以为主动免疫治疗提供新的解决方案。