控制胶质母细胞瘤细胞的研究

　　恶性神经胶质瘤是中枢神经系统的致命性和顽固性癌症之一，约占恶性脑肿瘤的80%。高的网络ltrative生长是胶质瘤较明显的特征，导致其高侵略性功能和频繁复发。胶质瘤患者整体生存较差，平均生存时间约9.7个月，5年生存率低于5%。在国际卫生组织的基础上，胶质瘤的等级根据恶性程度分为I到IIV级。胶质母细胞瘤被定义为胶质母细胞瘤WHOIV等级，统计数据显示，它被认为是预后较差的，而且普遍而广泛，每年约有1万例新诊断病例。

　　尽管有很多进步，比如新颖的手术策略GBM患者预后仍较差，复发率较高。神经胶质瘤细胞的转移特征是侵入性手术和放疗的关键障碍。障碍物还含有耐药性，神经胶质瘤细胞和细胞增殖失控细胞凋亡，并在渗透中迅速分散。开发更合适的治疗方法，深入研究GBM探索新的诊断和预后生物标志物迫在眉睫。

　　两种粘病毒抗性基因-MX1和MX2人染色体21q22.3、产生基因复制事件。这两个基因代码属于家族发动状鸟苷MXA和MXB蛋白质。人MxA蛋白质用于通过二FFerent各种机制病毒，包括机制病毒，DNA病毒和RNA病毒具有很大的抗病毒活性。两个人有63%相同的氨基酸序列MXB和MxA蛋白质中的一种三维结构几乎与其他结构重叠。它作为干扰素诱导的制约因素靶向HIV-1、可以结合HIV-1外壳和控制其核进口，较终导致其复制在入境后的步骤控制。

　　表明MXB参与先天性免疫反应对病毒感染和肿瘤发育重要。MXB它包括核定位信号并出现在核孔复合物中，这表明它在细胞周期的进展中起着重要的作用，并影响核输入。研究人员假设MX2基因表达水平可能参与人类肿瘤的发展。对癌症功能的研究很少。研究人员先检查了一下GBM四种人脑胶质瘤细胞系患者MX2表达。同时，通过Kaplan-Meier方法分析GBM病人的整体存活率。然后进行细胞转染实验，建立稳定的表达MX2.神经胶质瘤细胞。

　　研究了MX对细胞活动的影响包括增殖、迁移和入侵，并试图解决其在胶质瘤中的潜在机制。胶质母细胞瘤患者手术共33对GBM组织及相应的正常组织。将全部组织样本保存在液氮中直至测试。根据国际卫生组织的标准，病理学证实了GBM病人的诊断。全部患者的临床病理特征，包括年龄、性别、WHO等级和MX2。

　　全部细胞在RoswellParkMemorialInstitute-在1640培养基中培养，补充胎牛血清10%，U每毫升青霉素和1000ug每毫升链霉素的温度为37°C。在5％CO2气氛中。当细胞处于对数期时，用胰蛋白酶消化并悬挂在培养基中进行进一步实验。使用Chat-green荧光蛋白Mx43质粒细胞转染稳定表达MX2。首先包含10%FBS的Iscove'sModifiedDulbecco'sMedium中培养U251人神经胶质瘤细胞。然后按照说明使用Lipofectamine2000试剂将GFP-MX2质粒转染到U251细胞中。

　　G418用于选择稳定表达表达MX2的U251细胞。根据用户指南，使用TRIzolregent总提取组织或细胞RNA。然后用于合成互补DNA的逆转录酶M-MLV。较后，使用SYBRPremixExTaqTM试剂盒通过定量逆转录聚合酶链反应测定法检测样品中的样品MX2表达水平。

　　通过3-2、5-二苯基四唑溴化物检测来检测MX2对癌细胞活力的影响。首先将5000个U每孔96孔板接种251细胞24小时，然后用251细胞接种GFP-MX2质粒转染。测量前，在每个孔中加入20个uLMTT溶液继续孵化4小时。然后在1000个孔添加到每个孔中uL二甲基亚砜。通过ELISA读数器测量560nm光密度。

　　全部测量重复三次。研究MX2.分子机制，细胞外信号调节激酶控制剂，p控制剂和核因子38-κB控制剂、二硫代氨基甲酸酯GFP-MX2质粒或未转染U251细胞中。用同样的方法检测细胞活力。使用transwellchamber和基质胶侵袭进行细胞迁移和侵袭测定。

　　细胞转染后48小时，无血清培养基中的U251细胞接种涂有或不涂10ug每毫升基质胶的上室。将含有10％FBS介质加入下室。孵化48小时后，将迁移或侵入的细胞固定在甲醇中，用0.1%结晶紫染色。较后，在显微镜下计数染色细胞。

　　利用放射免疫沉淀测定缓冲液裂解U251细胞。通过BCA蛋白质测量试剂盒测量蛋白质的量。蛋白质通过10%十二烷基硫酸钠凝胶电泳分离，电泳转移到聚偏二氟乙烯膜。接下来，用5%的牛奶将膜关闭1小时，与一抗体关闭4小时℃温育过夜，与二抗体一起温育。洗涤膜后，使用增强的化学发光检测试剂盒检测信号。

　　全部抗体均购自CellSignalingTechnology，包括抗B-肌动蛋白，抗p38，抗磷酸化p38，抗ERK，抗磷酸，抗NF-κBp65、抗核纤层蛋白B和抗核纤层蛋白BB-作用。B-作用是加载对照。

　　为了挖掘MX2如何参与GBM，33对检查GBM相邻正常组织的组织和表达水平。MX2的在GBM该组织的表达能力低于非癌性组织。为了验证MX2是否在胶质母细胞瘤中下调，也测试了它在四种类型中GBM细胞系和正常星形胶质细胞HEB中的水平。

　　4个GBM细胞中的MX2级也低于正常星形胶质细胞。全部这些都是暗示MX2可能参与GBM发病机制。在4个GBM细胞中，U251细胞较低MX2级，因此选择用于细胞转染进行深入研究MX2的功能。Kaplan-Meier该模型用于分析MX2水平与GBM患者术后生存率的相关性。结果表明较低MX2表达水平的患者整体存活率较差，这意味着表达水平的患者整体存活率较差GB2患者的MX2表达水平与术后存活率呈负相关。MX2可能是GBM患者预后的候选生物标志物也可能是对的GBM进步具有控制作用。

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