结合形态学和细胞观察与表观遗传分析的较新技术,进行了较有趣、较丰富的综述。作者将表观遗传学定义为“由基础DNA由于序列变化以外的机制导致的表型或遗传变化”。这个综述集中了DNA基因调控引起的甲基化。在大多数脊椎动物物种中,DNA甲基化反应仅限于细胞嘧啶核苷酸;特别是那些形成5'-胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤-3'二核苷酸的。
这些CpG位点通常位于基因5'末端的簇中,并称为CpG岛。这些CpG岛上的甲基化状态涉及重要的细胞增殖活动,包括发育和肿瘤。由于单个细胞可能是表观遗传异质,因此需要结合形态学和表观遗传分析的方法。详细描述了这两种方法:(1)histoendonuclease-linked检测DNA甲基化位点,(2)挂锁探针和滚环扩增及其用于检测不同甲基化位点的样本。
在两个实施示例中,它们显示TATA单个盒子上游CpG将甲基化添加到基因座上,完成新型MeCP2述介导的基因沉默机制。表观遗传分析结合形态学和较小细胞的方法。作者详细描述了这两种方法:(1)histoendonuclease-linked检测DNA甲基化位点,(2)挂锁探针和滚环膨胀,以及如何检测不同甲基化位点的样本。在两个实施示例中,它们显示TATA单个盒子上游CpG将甲基化添加到基因座上,完成新型MeCP2述介导的基因沉默机制。
小鼠小脑发育和组织发生过程中的细胞迁移过程。评估从对图像方法和分析方案的一般描述开始,以监测开发过程中的细胞迁移。下面将详细解释图像分辨率可能对迁移跟踪分析的准确性的影响。在一般介绍之后,综述侧重于与胚胎中的细胞迁移相关的特定方面,导致成熟小脑的多层和细胞类型的发展。
详细描述了固定和处理组织切片和活细胞模型的实验结果。该评估得到了文献引用的广泛支持,详细描述了所使用的实验和示踪方法,包括在迁移过程中识别每个细胞类型所需的表格标记。评估的结论是,尽管有大量关于小脑发育的详细信息,但过程的关键方面,包括与细胞迁移相关的分子机制,仍有待澄清。
脊索瘤是一种源于脊索残余的恶性骨肿瘤,对常规化学和放射疗法具有很高的抗性。脊索瘤建立的细胞系维持原发性肿瘤的特征,如不同的细胞质空泡化。脊索细胞通常含有充满液体的细胞器,代表独特的溶酶体相关结构。溶酶体螯合已被证明是不同类型肿瘤的药物抗性机制。对三个脊索瘤细胞系的液泡系统进行了详细的分析,并测试了氯喹是否单独或与多柔比星一起使用。
使用溶酶体示踪剂红DND-对溶酶体膜蛋白LAMP1抗体,被鉴定为核周酸性细胞器,包括溶酶体、自噬体、内涵体和吞噬体。然而,虽然大液泡是LAMP1阳性,无积累溶酶体示踪剂红色DND-99,被解释为代表脊索空泡的残留物。高压冷冻和冷冻替代细胞的三维重建揭示了溶酶体和线粒体之间的密切关系。
脊索瘤细胞系的另一个特征是大量的糖原,其中一些被糖原去除。较后,利用较高单一试剂模型研究了氯喹和多柔比星对脊索瘤细胞生长的协同作用。但没有观察到氯喹的明显效果。
细胞的形状与其功能状态有关,因此在许多实验和临床研究领域准确检测形状变化至关重要。新的细胞形状准确形态学分析方法的发展及其对鼠神经元的估计NG影响108-15细胞形态的用途。毒素ostreolysinA和pleurotolysinB成孔复合物导致小鼠神经元NG细胞的广泛形态变化包括细胞肿胀和质膜起泡。
手稿中介绍的方法包括提取细胞轮廓的新算法,以及使用修改后的圆度测量C?2从共焦图像中获取细胞形状。修改后的圆度测量定义了细胞形状与圆形的不同程度,可以更好地检测细胞形状的微小变化,从而实现易于检测的数值结果。
应用所描述的分割方法,并使用度量有助于检测细胞和泡沫,以及重要的质膜损伤。虽然应用图像分析来分析神经细胞的毒素作用,但这种方法应该更广泛地应用于细胞形状研究。
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