诱导胶质母细胞瘤细胞死亡研究

　　原发性恶性脑肿瘤和其他中枢神经系统肿瘤的全球发病率为每1万例3000例.4。多形胶质母细胞瘤是较常见的原发性脑恶性肿瘤，约占所有神经胶质瘤的50%。GBM治疗，包括手术、化疗和放疗，中位总生存时间不到3年。因此，有必要探索一种能提高胶质母细胞瘤治疗效果的新型化学疗法。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体是多种肿瘤细胞的肿瘤坏死因子超家族成员，对正常细胞几乎没有影响。

　　然而，大多数神经胶质瘤细胞对TRAIL细胞凋亡或多或少不敏感。相关研究表明，一些癌症治疗剂可以通过提高死亡受体DR4和DR对各种癌细胞致敏TRAIL诱导细胞凋亡。当TRAIL与死亡受体结合时，与细胞内死亡结构域结合，激活细胞质连接蛋白FAS相关死亡结构域。募集的FADD依次通过其死亡效应子域PROCASPASE-8相互作用，形成诱导死亡的信号复合物。然后，DISC激活胱天蛋白酶8PARP凋亡是通过死亡受体诱导的。

　　雷公藤红素是从中医中提取的，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药理性质。雷公藤红素具有广谱抗癌活性，包括恶性胶质瘤活性。CELASTROL会导致小鼠体重明显减轻，说明小鼠体重明显减轻CELASTROL毒性对正常细胞和组织构成威胁。因此，迫切需要降低天青素的毒性。此外，特定的化学物质包括雷公藤红素的组合TRAIL可以上调DR4和DR5增强TRAIL抗癌活性。在目前的研究中，试图确定CELASTROL和TRAIL协同治疗的分子机制。

结果表明，在低浓度下，CELASTROL对正常细胞几乎无毒，但神经胶质瘤细胞上调DR5表达，增强TRAIL细胞凋亡。

　　研究人员较初通过了CCK-确定了8测定法CELASTROL和TRAIL不同的胶质细胞细胞系和正常的人星形胶质细胞系HEB抑制细胞增殖。在有限剂量范围内，U87-MG，U251和LN229细胞相对具有TRAIL耐药性，而HEB细胞几乎完全正确TRAIL不敏感。CELASTROL神经胶质瘤细胞系中的细胞活力通过浓度依赖降低。在细胞系中，U87-MG细胞系似乎是对的CELASTROL较敏感。观察在高达1UM的浓度下，CELEASTROL在HEB细胞中诱导的细胞死亡相对较低。

　　将所有神经胶质瘤细胞系暴露在固定浓度下TRAIL和CELASTROL浓度从0到1UM范围内24小时。由于用0.5UMCELASTROL加100NG/毫升TRAIL处理可显著减少U87-MG因此，在研究人员的研究中，所有这些后续实验都使用了这些细胞的数量CELEASTROL和TRAIL浓度。在相差显微镜下，观察未经处理的显微镜U87-MG细胞看起来很健康。

　　与对照组相比，TRAIL-治疗组和组合组表现出更多破碎和分离的细胞。正如用HOECHST33258揭示了细胞核染色，以及TRAIL与处理组相比，共处理组明显具有更多的染色质浓缩和碎片化。TRAIL在处理组中，细胞变成圆形，染色均匀。此外，TUNEL测定结果分别与这些结果相同HOECHST33258染色一致。

　　为了确定CELASTROL是否与TRAIL通过凋亡诱导细胞死亡的结合，研究人员通过凋亡诱导细胞死亡FCM评估了凋亡率和SUB-G1群体。细胞用CELASTROL和TRAIL处理后，膜联蛋白V-FITC碘化丙啶染色以确定细胞凋亡率。如预期，联合治疗组的凋亡细胞数量明显大于单一治疗组的细胞数量。一些TRAIL抗性人肿瘤细胞系可以容易被TRAIL通过上调TRAIL表达受体和某些化学治疗剂。

　　因此确定CELASTROL是否可以在MRNA诱导蛋白质水平U87-MG细胞中DR5的表达。与对照处理相比，雷公藤红素比增加DR5蛋白质表达，并观察雷公藤红素表达增加剂量的趋势。用0.5UMCELASTROL在处理过的细胞中DR5的基因表达明显高于未经处理的细胞。研究人员进一步研究DR5上调是否对雷公藤红素刺激致敏？TRAIL转染和诱导细胞凋亡是必不可少的DR5的SIRNA减少细胞DR5的基本表达水平在基因和蛋白质水平。

　　在NCSIRNA在转染细胞中，协同治疗组的细胞活力得到有效降低，而在转染细胞中，NCSIRNA与转染组中观察到的相比，DR5SIRNA在转染细胞中，细胞活力显著提高。此外，DR5表达敲低显著阻断CASPASE-3和CASPASE-8和PARP裂解联合治疗组。

　　进一步评估DR5表达增加后下游凋亡信号分子的激活，检查裂解CASPASE-8，裂解的CASPASE-3和PARP蛋白质表达。单独用CELASTROL处理细胞不影响裂解CASPASE-8，裂解的CASPASE-3或裂解的PARP的表达。但与单独的TRAIL与治疗相比，与TRAIL和CELASTROL联合治疗使这些因素的激活增加了两倍左右。进一步研究原因CELASTROL和TRAIL引起的CASPASE激活协同增加是否导致细胞凋亡，使用25UMZ-VAD-FMK细胞被预处理以抑制CASPASE激活和观察到这种治疗显著抑制了协同治疗诱导的细胞凋亡。

　　降低化疗敏感性是复发性胶质母细胞瘤的标志。TRAIL它是一种理想的抗癌化疗药物，能杀死肿瘤细胞，保持大多数正常细胞的完整性。TRAIL选择性细胞杀伤的作用诱饵受体的高表达和DR4和DR与正常细胞表面相比，肿瘤细胞表达较低。大多数神经胶质瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡耐。确定降低耐药性的方法非常重要。与其他抗癌剂结合TRAIL能克服一些肿瘤细胞的抗性TRAIL。

　　雷公藤红素是一种具有许多药理性质的三萜烯，其中大部分是其抗癌和抗炎活性。但是，CELASTROL不可避免的毒性是其应用的较大缺点。与其他癌症治疗剂合用，减少西那司的剂量，可有效降低其细胞毒性及相关副作用[27]。基于这些发现，首先使用它们CCK-8分析法单独联合检查CELASTROL和TRAIL正常人星形胶质HEB细胞毒性。研究人员观察0.5UM的CELASTROL加100NG/毫升的TRAIL对HEB细胞几乎没有影响，这种联合治疗有效地抑制了细胞U87-MG细胞的生长。

　　因此，发现较低评估剂量CELASTROL有效地使U87-MG细胞对TRAIL诱导细胞死亡敏感。此外，胶质瘤细胞的生存能力与同浓度相同TRAIL相同浓度的CELASTROL增加和减少。大量研究表明，几种化学治疗剂可以通过增加来增加DR4和DR5的表达可以减少神经胶质瘤细胞的表达TRAIL的抵抗力。此外，DR5而非DR4优先诱导转化或恶性细胞凋亡，证明DR5作为诱导肿瘤选择性凋亡的细胞因子，可用于癌症治疗。

　　胶质细胞瘤主要表达成胶质细胞瘤DR5.神经胶质瘤患者的延长寿命是积极和高表达的DR5相关，延长寿命和DR4表达之间没有明显的相关性。因此，研究研究进行了评估DR5表达。尽管之前的研究报道了恶性神经胶质瘤细胞对恶性神经胶质瘤细胞的报道TRAIL的敏感性与DR4和DR5的表达无关，但数据显示，CELASTROL处理显著增加U87-MG细胞中DR5的表达，呈剂量依赖性。

　　DR5的敲低显著减弱和减弱CELASTROL和TRAIL共同处理引起的凋亡，说明共同处理引起的凋亡DR5在这种凋亡方式中起着重要作用。潘卡斯蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK添加可有效抑制原因CELASTROL增强的TRAIL诱导的细胞毒性表明，协同治疗诱导的细胞死亡取决于胱天蛋白酶，并通过死亡受体进行。

　　总之，非细胞毒性剂量首次显示CELASTROL可使人胶质母细胞细胞对TRAIL诱导细胞死亡明显敏感，其潜在机制已初步明确。研究人员证明，这一点很敏感。CELASTROL和TRAIL组合不仅增加了TRAIL抗癌作用也减少了CELASTROL毒性使这种联合治疗方案成为杀死肿瘤的有希望的策略。不幸的是，尽管我们不能进一步研究体内的协同作用，但我们希望建立人类神经胶质瘤的原位植入模型，以便将来进行体内分析。

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