替莫唑胺治疗胶质母细胞瘤耐药性研究

　　胶质母细胞瘤是成人中较常诊断的原发性脑恶性肿瘤之一。即使采用积极的多模式治疗，其预后也很差，5年生存率低于5%。GBM综合治疗策略包括较大程度的手术切除、放疗和替莫唑胺化疗。TMZ通过残留鸟嘌呤，N-7或O-6烷基化减弱GBM生长，从而改善GBM病人的整体生存。但大多数病人仍会在7个月内复发肿瘤。逐渐获得的。GBM的TMZ耐药性导致肿瘤进展和复发，因此在很大程度上限制了肿瘤TMZ对GBM病人的好处。

　　GBM细胞主要通过O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶依赖性DNA修复获得对TMZ的抗性，而MGMT缺失会导致错配修复和随后的修复DNA双链断裂。研究证明，多个分子有助于获得TMZ阻力。确定复发性。GBM新的潜在化学疗法的目标需要进一步研究TMZ抗性机制。

　　越来越多的数据表明，激酶是癌症各种生物行为的必要功能，表明激酶可能成为癌症的新治疗目标。AXL受体酪氨酸激酶对广泛的生物功能至关重要，包括GBM增殖、丝分裂、迁移、侵袭和抗炎。AXL已被认定为位于纤连蛋白III两个免疫球蛋白样结构的细胞外激酶。AXL富含GBM肿瘤坏死区周围的假神经胶质瘤细胞，以及AXL功能损伤可减少小鼠模型中神经胶质瘤细胞的生长和迁移。

　　AXL表达可能与间充质神经胶质瘤干细胞有关，后者被认为是正确的GBM治疗抵抗力较强的亚型预示着治疗抵抗力较强的亚型GBM患者预后较差，15为GBM治疗的未来发展提供了有力的证据。本文分析了耐TMZ的GBM对细胞系的转录组谱进行鉴定AXL为GBM潜在的药物激酶。此外，在耐TMZ的GBM细胞中AXL表达显著增加，外源抑制AXL导致GBM细胞生长和TMZ耐药性减弱。

　　AXL抑制剂和TMZ体外和体内的组合显著降低了耐久性TMZ的GBM细胞增殖和肿瘤发生，说明有协同作用。总之，AXL是TMZ敏感性和GBM患者预后的重要生物分子预测指标可能成为化疗耐药性GBM新的潜在治疗目标。

　　探索神经胶质瘤获得的神经胶质瘤TMZ耐药性的关键调节因子和分子机制，采用之前发布的关键调节因子和分子机制GEO数据库分级双聚类。在668个已知的激酶编码基因中，与简单的对照细胞相比，AXL是TMZ耐药性GBM细胞中较先进的激酶编码基因之一表明，AXL神经胶质瘤的发生可能非常重要。获得TMZ电阻。AXL明显丰富了GBM，GBM被认为是较致命的神经胶质瘤类型。

　　基于表观遗传特征，GBM细胞可分为几种亚型，与完全不同的生物行为有关，包括肿瘤增殖、复发和耐药性治疗。比较了不同GBM亚型之间的AXL表达。结果表明，AXL表达明显富集于间充质亚型，这被认为对治疗更有抵抗力，并导致肿瘤复发。可观察到增生性血管区和微血管增生区AXL表达增加与肿瘤复发有关GBM中。较后，使用5个GBM该品系印有蛋白质痕迹，并将NHA用于非肿瘤对照。

　　结果显示，和NHA细胞相比，GBM细胞中AXL表达显著增加。总之，这些结果表明GBM中AXL增加可能对治疗耐药性和肿瘤复发至关重要。

　　这些结果表明AXL可能是GBM生物标记。为了评估这种可能性，从TCGA数据库分析了514名可用神经胶质瘤患者的总生存期。与AXL与表达较高的患者相比，AXL表达较低的患者术后生存期明显延长。通过分析伦勃朗数据库进行评估GBM中AXL的表达。与低度神经胶质瘤相比，GBM中的AXL明显增加。IHC2008年至2017年，从医院神经外科切除患者收集的68例胶质瘤肿瘤组织中进行了手术切除AXL表达检测。

　　AXL肿瘤细胞被发现在细胞质和细胞膜中。GIS评分显示，与低级神经胶质瘤样本相比，AXL在GBM明显富集。关于患者的生存，用神经胶质瘤表达高水平AXL与患者相比，AXL神经胶质瘤表达较低的患者总生存期较长。当专门针对GBM病人，得到了类似的结果。结果表明AXL可能是GBM特定临床相关激酶。

　　彻底研究AXL在GBM中获得性抗TMZ根据之前的出版物，建立了功能中的作用U87和U251的TMZ抗性体外培养物。与含有TMZ培训基3个月后，U87和U251细胞与它们的自然对比。使用耐TMZ的GBM细胞系进行qRT-PCR分析，结果表明U87和U251细胞的耐TMZ的群体中AXL表达显著增加。此外，蛋白质痕迹的结果也显示在耐受性上TMZ的U87和U251细胞中AXL和AXL磷酸上调。

　　进一步评估AXL在GBM中间功能，用2个AXL慢病毒shRNA克隆或非靶向对照慢性病毒转导GBM细胞系U87和U251。qRT-PCR蛋白质印迹分析均显示在蛋白质痕迹分析中mRNA水平上AXL显着下调。为评估AXL对TMZ先用耐药功能shNT或shAXL慢病毒转导U87TMZ耐药细胞，然后是300uM的TMZ处理。用shAXL慢病毒转移后，U87TMZ耐药细胞中的体外细胞生长试验表明细胞增殖减少和TMZ敏感性增强。

　　流式细胞仪检测凋亡的方法是使用流式细胞仪检测凋亡shAXL或shNT预转导的U87TMZ耐药细胞。当细胞经历或早期凋亡或晚期凋亡显著增加时，细胞和那些只接受的细胞TMZ。采用颅内异种移植小鼠模型研究ALX降低体内肿瘤的功能。与经shAXL转导的U87TMZ耐药细胞结合TMZ与处理过的小鼠相比，shNT转导的U87TMZ耐药细胞异种移植的小鼠迅速出现肿瘤相关症状，GBM细胞中AXL沉默的anti-TMZ抗性作用。

　　为了澄清依赖AXL的TMZ分子机制，在U87GBM细胞通过慢病毒感染进行AXL人工表达。qRT-PCR蛋白质印迹分析证实，AXL过表达的U87细胞中AXL和磷酸化AXL均大幅增加。体外细胞生长试验表明，外源性细胞生长试验表明，AXL过表达后TMZ抵抗力显著增加。用TMZ处理是否有ALX过表达的U87细胞，分析细胞凋亡。AXL过表达后TMZ增强抵抗力，表明AXL有助于GBM中获得性TMZ抗性。

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